Komplet PCR za mišično tkivo

Hitro pomnoževanje ciljnega gena neposredno iz vzorcev živalskega tkiva brez ekstrakcije.

Komplet PCR za mišje tkivo ima edinstveno zasnovo embalaže, ki vključuje vse reagente za hitro pripravo genomske DNA in pomnoževanje PCR. Uporablja se za enostopenjsko čiščenje DNK genoma iz mišjih tkiv (rep, uho in prsti) ter za poznejšo PCR amplifikacijo in detekcijo. Celoten postopek ne vključuje homogenizacije, razbijanja, razgradnje čez noč, ekstrakcije organskega topila, obarjanja etanola ali korakov čiščenja kolone. S preprostimi in hitrimi postopki je mogoče doseči stabilne rezultate.

2 × Dir PCR MasterMix, ki ga vsebuje ta komplet, je zelo združljiv reagent PCR, ki lahko učinkovito in specifično ojača DNA, ne da bi bilo treba odstraniti nečistoče, kot so beljakovine. Ta reagent vsebuje vroč zagon, modificiran s protitelesiTaq DNA polimeraza, dNTP, MgCl2, pufri, pa tudi ojačevalnik, optimizator in stabilizator za PCR reakcijo. Reakcijo PCR lahko izvedemo tako, da preprosto dodamo grobo ekstrahirano šablono in posebne temeljne premaze. Celoten postopek je hiter, preprost, občutljiv, specifičen in stabilen, kar je še posebej primerno za visoko zmogljivo presejanje. 2 × Dir PCR MasterMix vsebuje premiksno elektroforezno barvilo, tako da se lahko produkti PCR po reakciji pošljejo neposredno v elektroforezo. 3 'konec izdelka PCR ima A-rep, ki se lahko uporabi za kloniranje TA.

Mačka. Ne Velikost pakiranja
4992531 20 µl × 50 rxn
4992532 20 µl × 200 rxn

Podrobnosti o izdelku

Potek dela

Eksperimentalni primer

Pogosta vprašanja

Oznake izdelkov

Lastnosti

■ Enostavno in hitro: Genomsko DNA je mogoče hitro izvleči iz mišjih tkiv v 60 minutah brez mletja v tekočem dušiku in ekstrakcije organskega topila.
■ Široka uporaba: primeren je za enostopenjsko ekstrakcijo genomske DNK iz repa miši, ušesa, prstov na nogi in drugih tkiv.
■ Visoka specifičnost: Taq polimeraza, uporabljena v tem izdelku, je encim z vročim zagonom, modificiran s protitelesi, z visoko afiniteto do matrike in primerja ter specifičnostjo ojačanja, kar je še posebej primerno za genotipizacijo in transgeno identifikacijo.
■ Odkrivanje genov: Z izdelkom je enostavno upravljati z zanesljivimi rezultati, še posebej pa je primeren za visoko zmogljivo analizo in odkrivanje mišjih tkiv

Vse izdelke je mogoče prilagoditi za ODM/OEM. Za podrobnosti,kliknite prilagojeno storitev (ODM/OEM)


  • Prejšnji:
  • Naslednji:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×

    Workflow

    Experimental Example

    Z uporabo kompleta za neposredno PCR miške in ustreznega izdelka dobavitelja A za ojačanje fragmentov 1000 bp, 2000 bp in 3000 bp iz repa miši, ušesa miške in repa podgan. Rezultat je pokazal, da ima komplet za PCR mišjega tkiva boljšo specifičnost in uspešnost.

    V: Brez ojačevalnih pasov

    Predloga A-1

    ■ Predloga vsebuje beljakovinske nečistoče ali zaviralce Taq itd. - Očistite predlogo DNK, odstranite nečistoče beljakovin ali izvlecite DNA šablone s kompleti za čiščenje.

    ■ Denaturacija šablone ni popolna - - ustrezno povečajte temperaturo denaturacije in podaljšajte čas denaturacije.

    ■ Razgradnja predloge-predlogo pripravite znova.

    Primer A-2

    ■ Slaba kakovost temeljnih premazov-Ponovno sintetizirajte temeljni premaz.

    ■ Razgradnja temeljnega premaza —– Za ohranitev razporedite temeljne premaze z visoko koncentracijo v majhen volumen. Izogibajte se večkratnemu zamrzovanju in odmrzovanju ali dolgotrajnemu kriokonzerviranju pri 4 ° C.

    ■ Neprimerna zasnova temeljnih premazov (npr. Dolžina premaza ni zadostna, dimer nastane med temeljnimi premazi itd.)

    A-3 mg2+koncentracija

    ■ Mg2+ koncentracija je prenizka —— Pravilno povečajte Mg2+ koncentracija: optimizirajte Mg2+ koncentracijo z vrsto reakcij od 1 mM do 3 mM z intervalom 0,5 mM za določitev optimalnega Mg2+ koncentracija za vsako šablono in temeljni premaz.

    A-4 Temperatura žarjenja

    ■ Visoka temperatura žarjenja vpliva na vezavo temeljnega premaza in šablone. —— Zmanjšajte temperaturo žarjenja in optimizirajte stanje z naklonom 2 ° C.

    A-5 Podaljšanje časa

    ■ Kratek čas podaljšanja —— podaljšajte čas podaljšanja.

    V: Lažno pozitivno

    Fenomeni: Negativni vzorci prikazujejo tudi pasove ciljnega zaporedja.

    A-1 Kontaminacija PCR

    ■ navzkrižna kontaminacija ciljnega zaporedja ali produktov pomnoževanja - previdno, da vzorca, ki vsebuje ciljno zaporedje, ne pipetirate v negativni vzorec ali ga razlijete iz epruvete za centrifugiranje. Reagente ali opremo je treba avtoklavirati, da se odstranijo obstoječe nukleinske kisline, obstoj kontaminacije pa je treba ugotoviti s poskusi negativne kontrole.

    ■ Kontaminacija reagentov —— Razredčite reagente in jih shranite pri nizki temperaturi.

    A-2 Primer

    ■ Mg2+ koncentracija je prenizka —— Pravilno povečajte Mg2+ koncentracija: optimizirajte Mg2+ koncentracijo z vrsto reakcij od 1 mM do 3 mM z intervalom 0,5 mM za določitev optimalnega Mg2+ koncentracija za vsako šablono in temeljni premaz.

    ■ Nepravilna zasnova temeljnega premaza in ciljno zaporedje ima homologijo z neciljnim zaporedjem. —— Premazi za ponovno oblikovanje.

    V: Nespecifično ojačanje

    Fenomeni: Amplitski pasovi PCR niso skladni s pričakovano velikostjo, bodisi veliki ali majhni, včasih pa se pojavijo tako specifični ojačevalni pasovi kot nespecifični ojačevalni pasovi.

    Primer A-1

    ■ Slaba specifičnost temeljnega premaza

    —— Premaz za ponovno oblikovanje.

    ■ Koncentracija temeljnega premaza je previsoka - Pravilno povečajte temperaturo denaturacije in podaljšajte čas denaturacije.

    A-2 mg2+ koncentracija

    ■ Mg2+ koncentracija je previsoka —— Pravilno zmanjšajte koncentracijo Mg2+: Optimizirajte Mg2+ koncentracijo z vrsto reakcij od 1 mM do 3 mM z intervalom 0,5 mM za določitev optimalnega Mg2+ koncentracija za vsako šablono in temeljni premaz.

    A-3 Termostabilna polimeraza

    ■ Prekomerna količina encima - - Zmanjšajte količino encima v intervalih 0,5 U.

    A-4 Temperatura žarjenja

    ■ Temperatura žarjenja je prenizka--ustrezno povečajte temperaturo žarjenja ali uporabite dvostopenjsko metodo žarjenja

    A-5 PCR cikli

    ■ Preveč ciklov PCR - Zmanjšajte število ciklov PCR.

    V: Zamašeni ali razmazani trakovi

    Primer A-1—— Slaba specifičnost ——Načrtujte temeljni premaz, spremenite položaj in dolžino temeljnega premaza, da povečate njegovo specifičnost; ali izvedite ugnezdeni PCR.

    Predloga DNK A-2

    —— Predloga ni čista —— Očistite predlogo ali izvlecite DNA s kompleti za čiščenje.

    A-3 mg2+ koncentracija

    ——Mg2+ koncentracija je previsoka - pravilno zmanjšajte Mg2+ koncentracija: optimizirajte Mg2+ koncentracijo z vrsto reakcij od 1 mM do 3 mM z intervalom 0,5 mM za določitev optimalnega Mg2+ koncentracija za vsako šablono in temeljni premaz.

    A-4 dNTP

    —— Koncentracija dNTP je previsoka —— Ustrezno zmanjšajte koncentracijo dNTP

    A-5 Temperatura žarjenja

    —— Prenizka temperatura žarjenja —— Primerno povečajte temperaturo žarjenja

    A-6 cikli

    —— Preveč ciklov —— Optimizirajte število ciklov

    V: Koliko vzorčne DNA je treba dodati v 50 μl reakcijski sistem PCR?
    ytry
    V: Kako povečati dolge fragmente?

    Prvi korak je izbira ustrezne polimeraze. Navadne Taq polimeraze ni mogoče lektorirati zaradi pomanjkanja 3'-5 'eksonukleazne aktivnosti, neujemanje pa bo močno zmanjšalo učinkovitost podaljšanja fragmentov. Zato navadna Taq polimeraza ne more učinkovito ojačati ciljnih fragmentov, večjih od 5 kb. Taq polimerazo s posebno modifikacijo ali drugo polimerazo visoke zvestobe je treba izbrati za izboljšanje učinkovitosti podaljšanja in zadovoljevanje potreb po pomnoževanju z dolgimi fragmenti. Poleg tega je za ojačanje dolgih fragmentov potrebna tudi ustrezna prilagoditev zasnove temeljnega premaza, čas denaturacije, čas podaljšanja, pH pufra itd. Običajno lahko temeljni premazi z 18-24 bp vodijo do boljšega pridelka. Da bi preprečili poškodbe šablone, je treba čas denaturacije pri 94 ° C skrajšati na 30 sekund ali manj na cikel, čas za dvig temperature na 94 ° C pred ojačitvijo pa manj kot 1 minuto. Poleg tega lahko nastavitev temperature podaljška na približno 68 ° C in načrtovanje časa podaljšanja glede na hitrost 1 kb/min zagotovita učinkovito ojačanje dolgih fragmentov.

    V: Kako izboljšati zvestobo amplifikacije PCR?

    Stopnjo napake pri amplifikaciji PCR lahko zmanjšamo z uporabo različnih DNA polimeraz z visoko zvestobo. Med vsemi doslej odkritimi polimerazami Taq DNA ima encim Pfu najnižjo stopnjo napak in najvišjo zvestobo (glej priloženo tabelo). Poleg izbire encimov lahko raziskovalci dodatno zmanjšajo stopnjo mutacije PCR z optimizacijo reakcijskih pogojev, vključno z optimizacijo sestave pufra, koncentracijo termostabilne polimeraze in optimizacijo števila ciklov PCR.

    Tukaj napišite svoje sporočilo in nam ga pošljite