Komplet celic celice TGuide/tkivne genomske DNA

A-1 Nizka koncentracija celic ali virusa v začetnem vzorcu-obogatite koncentracijo celic ali virusov.

A-2 Nezadostna liza vzorcev-Vzorcev niso dobro premešali z liznim pufrom. Priporočljivo je, da 1-2-krat temeljito premešate s pulznim vrtinčenjem. —Nezadostna celična liza zaradi zmanjšanja aktivnosti proteinaze K. —Nezadostna celična liza ali razgradnja beljakovin zaradi nezadostnega časa tople kopeli. Predlagamo, da tkivo razrežemo na majhne koščke in podaljšamo čas kopeli, da odstranimo vse ostanke v lizatu.

A-3 Nezadostna adsorpcija DNA. -Pred prenosom lizata v centrifugirano kolono ni bilo dodanega etanola ali nizkega odstotka namesto 100% etanola.

A-4 pH vrednost elucijskega pufra je prenizka. -Prilagodite pH med 8,0-8,3.

Preostali etanol v eluentu.

—V eluentu je preostali pufer za pranje PW. Etanol lahko odstranimo s centrifugiranjem centrifugirane kolone 3-5 minut, nato pa postavimo na sobno temperaturo ali 50 ℃ inkubator za 1-2 min.

A-1 Vzorec ni svež. - Kot kontrolo izvlecite pozitivno vzorčno DNK, da ugotovite, ali se je DNK v vzorcu razgradila.

A-2 Nepravilna predhodna obdelava. —Vzrok za prekomerno mletje tekočega dušika, ponovno pridobivanje vlage ali preveliko količino vzorca.

Predhodne obdelave se morajo za različne vzorce razlikovati. Za vzorce rastlin temeljito zmeljite v tekočem dušiku. Za vzorce živali homogenirajte ali temeljito zmeljite v tekočem dušiku. Za vzorce s celičnimi stenami, ki jih je težko zlomiti, na primer bakterije G+ in kvas, se predlaga uporaba lizocima, litikaze ali mehanskih metod za razbijanje celičnih sten.

4992201/4992202 Komplet rastlinske genomske DNA uporablja metodo na osnovi kolone, ki za ekstrakcijo zahteva kloroform. Še posebej je primeren za različne vzorce rastlin, pa tudi za rastlinski suh prah. Hi-DNAsecure Plant Kit temelji tudi na kolonah, vendar ne potrebuje ekstrakcije fenola/kloroforma, zaradi česar je varen in netoksičen. Primeren je za rastline z visoko vsebnostjo polisaharidov in polifenolov. 4992709/4992710 DNAquick Plant System sprejema metodo na osnovi tekočine. Tudi ekstrakcija fenola/kloroforma ni potrebna. Postopek čiščenja je preprost in hiter, brez omejitev za začetne količine vzorca, zato lahko uporabniki količino prilagodljivo prilagodijo glede na eksperimentalne zahteve. Velike velikosti fragmentov gDNA je mogoče dobiti z visokim izkoristkom.

Genomsko DNA smo ekstrahirali iz različnih količin vzorcev polne krvi človeka s kompletom TIANamp Blood DNA Kit. Rezultati so naslednji. Rezultati so navedeni le kot referenčni, dejanski rezultati ekstrakcije so odvisni od pogojev vzorcev.

Ekstrakcijo DNK krvnega strdka lahko izvedemo z reagenti iz teh dveh kompletov, tako da preprosto spremenimo protokol v posebno navodilo za ekstrakcijo DNK krvnega strdka. Mehko kopijo protokola ekstrakcije DNK krvnega strdka lahko izdate na zahtevo.

Svež vzorec suspendiramo z 1 ml PBS, običajne fiziološke raztopine ali pufra TE. Vzorec popolnoma homogeniziramo s homogenizatorjem in oborino zberemo na dno epruvete s centrifugiranjem. Odstranite supernatant in oborite suspenzijo z 200 μl pufra GA. V skladu z navodili lahko izvedemo naslednje čiščenje DNK.

Za čiščenje gDNA v vzorcih plazme, seruma in telesnih tekočin je priporočljiv komplet mikro DNA TIANamp. Za čiščenje gDNA virusa iz vzorcev seruma/plazme se priporoča TIANamp Virus DNA/RNA Kit. Za čiščenje bakterijske gDNA iz vzorcev seruma in plazme se priporoča TIANamp Bacteria DNA Kit (za pozitivne bakterije je treba vključiti lizocim). Za vzorce sline sta priporočljiva komplet DNK hi-brisa in komplet DNK bakterij TIANamp.

Za ekstrakcijo genoma gliv se priporoča DNAsecure Plant Kit ali DNAquick Plant System. Za ekstrakcijo genoma kvasa se priporoča komplet DNK kvasa TIANamp (litikazo je treba pripraviti samostojno).