2 × Taq PCR MasterMix Ⅱ

Hitra mešanica PCR z visoko učinkovitostjo in visoko odpornostjo na stres.

2 × Taq PCR MasterMix Ⅱ je na novo optimiziran in nadgrajen 2 × PCR premiks, pripravljen za uporabo, z vsemi bistvenimi deli v reakciji PCR, razen vzorca DNA in primerjev.

Mačka. Ne Velikost pakiranja
4993001 1 ml
4993002 5x1 ml
4992912 20 x 5 x 1 ml
4992913 5 × 1 ml
4992920 20 × 5 × 1 ml
4992921 20 × 5 × 1 ml

Podrobnosti o izdelku

Eksperimentalni primer

Pogosta vprašanja

Oznake izdelkov

Lastnosti

■ Visoka učinkovitost ojačanja: fragmente DNA različnih velikosti (manj kot 5 kb) in vire je mogoče učinkovito ojačati.
■ Visoka občutljivost: Do 10 pg ciljnih fragmentov je mogoče povečati iz genomskih predlog.
■ Visoka odpornost na stres: Za šablone z visoko vsebnostjo nečistoč, kot je grobo ekstrahirana šablona/bakterijska kultura, se lahko ciljni fragment enostavno poveča. Ponavljajoče zamrzovanje in odmrzovanje ne vplivata na aktivnost polimeraze.
■ Priročno za uporabo: Reakcijski sistem je bil pripravljen enostavno in hitro. Ojačani fragment vsebuje 3 ′ konec dA-previs, ki je primeren za kloniranje TA.

Specifikacija

Vrsta: Taq DNA polimeraza
Vzorec: Očiščena/grobo ekstrahirana šablona/bakterijska kultura
Predloga: > 10 str
Velikost fragmenta: <5 kb
Aplikacije: PCR pomnoževanje fragmentov DNA, označevanje DNK, podaljšanje primerja, določitev zaporedja, obsežno odkrivanje genov, polkvantitativni poskusi PCR, odkrivanje DNA v sledovih itd.

Vse izdelke je mogoče prilagoditi za ODM/OEM. Za podrobnosti,kliknite prilagojeno storitev (ODM/OEM)


  • Prejšnji:
  • Naslednji:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
     2×Taq PCR MasterMix Ⅱ Slika 1. Predloge iz različnih virov smo ojačali s pomočjo TIANGEN Taq MasterMix II oziroma skupne Taq Mix od dobavitelja TR, da bi zaznali odpornost reagentov na stres. Rezultati kažejo, da lahko izdelki TIANGEN ojačijo ciljne fragmente iz surovih genomskih šablon in bakterijske kulture, odpornost na stres pa je boljša kot pri dobavitelju TR. O: Surova genomska šablona, ​​ekstrahirana s kompletom PCR TYANGEN TIANcombi DNA Lyse & Det. Prp/DN: Neobdelano pridobivanje in odkrivanje vzorcev človeške krvi. Riž: Surova ekstrakcija in odkrivanje vzorcev riža. B: PCR kolonije. PCR fragment je 700 bp.
    M: TIANGEN Marker III
     2×Taq PCR MasterMix Ⅱ Dobra univerzalnost za predloge iz različnih virov in različnih dolžin
    Slika 2. Fragmenti različnih virov in dolžin so bili ojačani z uporabo TIANGENA Taq MasterMix II (A) in navaden Taq Mešanica dobavitelja TK (B), dobavitelja TR (C), dobavitelja V (D) in dobavitelja G (E). Rezultati kažejo, da je celovita zmogljivost izdelkov TIANGEN najboljša v smislu sposobnosti ojačanja, specifičnosti in univerzalnosti.M: TIANGEN Marker III1: predloga genomske DNK soje (120 bp);

    2-3: predloga genomske DNA riža (694 bp, 2258 bp);

    4: predloga genomske DNA bombaža (200 bp);

    5: Escherichia coli predloga genomske DNA (2298 bp);

    6-7: Predloga DNA genoma miši (1 kb, 2 kb);

    8-10: Predloga genomske DNA podgane (1 kb, 2 kb, 2080 bp);

    11-18: Predloga DNK človeškega genoma (300 bp, 448 bp (GC%: 74,8%), 1100 bp, 750 bp,

    1000 bp, 1090 bp (GC%: 70,4%), 2 kb, 4 kb)

     2×Taq PCR MasterMix Ⅱ Visoka občutljivost
    Slika 3. Z uporabo TIANGENA smo ojačali različne koncentracije fragmentov podganjih in človeških DNA Taq MasterMix II (A), navaden Taq Mešanica dobavitelja V (B) in dobavitelja TK (C) za zaznavanje ojačitvene občutljivosti. Rezultati kažejo, da bi izdelek TIANGEN lahko ojačal ciljni fragment iz genomske šablone že pri 0,01 ng, njegova občutljivost pa je boljša od občutljivosti izdelkov dobaviteljev V in TK.M: TIANGEN Marker III, N: NTC Vnos šablona 1-8 : 200 ng, 100 ng, 50 ng, 20 ng, 10 ng, 1 ng, 0,1 ng, 0,01 ng.
    V: Brez ojačevalnih pasov

    Predloga A-1

    ■ Predloga vsebuje beljakovinske nečistoče ali zaviralce Taq itd. - Očistite predlogo DNK, odstranite nečistoče beljakovin ali izvlecite DNA šablone s kompleti za čiščenje.

    ■ Denaturacija šablone ni popolna - - ustrezno povečajte temperaturo denaturacije in podaljšajte čas denaturacije.

    ■ Razgradnja predloge-predlogo pripravite znova.

    Primer A-2

    ■ Slaba kakovost temeljnih premazov-Ponovno sintetizirajte temeljni premaz.

    ■ Razgradnja temeljnega premaza —– Za ohranitev razporedite temeljne premaze z visoko koncentracijo v majhen volumen. Izogibajte se večkratnemu zamrzovanju in odmrzovanju ali dolgotrajnemu kriokonzerviranju pri 4 ° C.

    ■ Neprimerna zasnova temeljnih premazov (npr. Dolžina premaza ni zadostna, dimer nastane med temeljnimi premazi itd.)

    A-3 mg2+koncentracija

    ■ Mg2+ koncentracija je prenizka —— Pravilno povečajte Mg2+ koncentracija: optimizirajte Mg2+ koncentracijo z vrsto reakcij od 1 mM do 3 mM z intervalom 0,5 mM za določitev optimalnega Mg2+ koncentracija za vsako šablono in temeljni premaz.

    A-4 Temperatura žarjenja

    ■ Visoka temperatura žarjenja vpliva na vezavo temeljnega premaza in šablone. —— Zmanjšajte temperaturo žarjenja in optimizirajte stanje z naklonom 2 ° C.

    A-5 Podaljšanje časa

    ■ Kratek čas podaljšanja —— podaljšajte čas podaljšanja.

    V: Lažno pozitivno

    Fenomeni: Negativni vzorci prikazujejo tudi pasove ciljnega zaporedja.

    A-1 Kontaminacija PCR

    ■ navzkrižna kontaminacija ciljnega zaporedja ali produktov pomnoževanja - previdno, da vzorca, ki vsebuje ciljno zaporedje, ne pipetirate v negativni vzorec ali ga razlijete iz epruvete za centrifugiranje. Reagente ali opremo je treba avtoklavirati, da se odstranijo obstoječe nukleinske kisline, obstoj kontaminacije pa je treba ugotoviti s poskusi negativne kontrole.

    ■ Kontaminacija reagentov —— Razredčite reagente in jih shranite pri nizki temperaturi.

    A-2 Primer

    ■ Mg2+ koncentracija je prenizka —— Pravilno povečajte Mg2+ koncentracija: optimizirajte Mg2+ koncentracijo z vrsto reakcij od 1 mM do 3 mM z intervalom 0,5 mM za določitev optimalnega Mg2+ koncentracija za vsako šablono in temeljni premaz.

    ■ Nepravilna zasnova temeljnega premaza in ciljno zaporedje ima homologijo z neciljnim zaporedjem. —— Premazi za ponovno oblikovanje.

    V: Nespecifično ojačanje

    Fenomeni: Amplitski pasovi PCR niso skladni s pričakovano velikostjo, bodisi veliki ali majhni, včasih pa se pojavijo tako specifični ojačevalni pasovi kot nespecifični ojačevalni pasovi.

    Primer A-1

    ■ Slaba specifičnost temeljnega premaza

    —— Premaz za ponovno oblikovanje.

    ■ Koncentracija temeljnega premaza je previsoka - Pravilno povečajte temperaturo denaturacije in podaljšajte čas denaturacije.

    A-2 mg2+ koncentracija

    ■ Mg2+ koncentracija je previsoka —— Pravilno zmanjšajte koncentracijo Mg2+: Optimizirajte Mg2+ koncentracijo z vrsto reakcij od 1 mM do 3 mM z intervalom 0,5 mM za določitev optimalnega Mg2+ koncentracija za vsako šablono in temeljni premaz.

    A-3 Termostabilna polimeraza

    ■ Prekomerna količina encima - - Zmanjšajte količino encima v intervalih 0,5 U.

    A-4 Temperatura žarjenja

    ■ Temperatura žarjenja je prenizka--ustrezno povečajte temperaturo žarjenja ali uporabite dvostopenjsko metodo žarjenja

    A-5 PCR cikli

    ■ Preveč ciklov PCR - Zmanjšajte število ciklov PCR.

    V: Zamašeni ali razmazani trakovi

    Primer A-1—— Slaba specifičnost ——Načrtujte temeljni premaz, spremenite položaj in dolžino temeljnega premaza, da povečate njegovo specifičnost; ali izvedite ugnezdeni PCR.

    Predloga DNK A-2

    —— Predloga ni čista —— Očistite predlogo ali izvlecite DNA s kompleti za čiščenje.

    A-3 mg2+ koncentracija

    ——Mg2+ koncentracija je previsoka - pravilno zmanjšajte Mg2+ koncentracija: optimizirajte Mg2+ koncentracijo z vrsto reakcij od 1 mM do 3 mM z intervalom 0,5 mM za določitev optimalnega Mg2+ koncentracija za vsako šablono in temeljni premaz.

    A-4 dNTP

    —— Koncentracija dNTP je previsoka —— Ustrezno zmanjšajte koncentracijo dNTP

    A-5 Temperatura žarjenja

    —— Prenizka temperatura žarjenja —— Primerno povečajte temperaturo žarjenja

    A-6 cikli

    —— Preveč ciklov —— Optimizirajte število ciklov

    V: Koliko vzorčne DNA je treba dodati v 50 μl reakcijski sistem PCR?
    ytry
    V: Kako povečati dolge fragmente?

    Prvi korak je izbira ustrezne polimeraze. Navadne Taq polimeraze ni mogoče lektorirati zaradi pomanjkanja 3'-5 'eksonukleazne aktivnosti, neujemanje pa bo močno zmanjšalo učinkovitost podaljšanja fragmentov. Zato navadna Taq polimeraza ne more učinkovito ojačati ciljnih fragmentov, večjih od 5 kb. Taq polimerazo s posebno modifikacijo ali drugo polimerazo visoke zvestobe je treba izbrati za izboljšanje učinkovitosti podaljšanja in zadovoljevanje potreb po pomnoževanju z dolgimi fragmenti. Poleg tega je za ojačanje dolgih fragmentov potrebna tudi ustrezna prilagoditev zasnove temeljnega premaza, čas denaturacije, čas podaljšanja, pH pufra itd. Običajno lahko temeljni premazi z 18-24 bp vodijo do boljšega pridelka. Da bi preprečili poškodbe šablone, je treba čas denaturacije pri 94 ° C skrajšati na 30 sekund ali manj na cikel, čas za dvig temperature na 94 ° C pred ojačitvijo pa manj kot 1 minuto. Poleg tega lahko nastavitev temperature podaljška na približno 68 ° C in načrtovanje časa podaljšanja glede na hitrost 1 kb/min zagotovita učinkovito ojačanje dolgih fragmentov.

    V: Kako izboljšati zvestobo amplifikacije PCR?

    Stopnjo napake pri amplifikaciji PCR lahko zmanjšamo z uporabo različnih DNA polimeraz z visoko zvestobo. Med vsemi doslej odkritimi polimerazami Taq DNA ima encim Pfu najnižjo stopnjo napak in najvišjo zvestobo (glej priloženo tabelo). Poleg izbire encimov lahko raziskovalci dodatno zmanjšajo stopnjo mutacije PCR z optimizacijo reakcijskih pogojev, vključno z optimizacijo sestave pufra, koncentracijo termostabilne polimeraze in optimizacijo števila ciklov PCR.

    Tukaj napišite svoje sporočilo in nam ga pošljite